Isu penguat

1. Masalah apa yang boleh timbul daripada penguatan PCR?
2. Mengapa tidak ada penguatan dalam PCR?
3. Apa yang menyebabkan penguat dalam PCR?
4. Apa yang menyebabkan kegagalan PCR?

Masalah apa yang boleh timbul daripada penguatan PCR?

Banyak masalah biasa dengan PCR dan RT-PCR dikenal pasti semasa elektroforesis gel agarosa produk tindak balas. Ini termasuk ketiadaan produk penguatan yang diharapkan, kehadiran produk yang tidak spesifik, pelekapan berlebihan, dan kehadiran band "primer dimer".

Mengapa tidak ada penguatan dalam PCR?

Enzim polimerase DNA tidak berfungsi

Enzim polimerase DNA bertanggungjawab untuk pemanjangan primer terikat di sepanjang helai DNA templat. Sekiranya enzim ini tidak lagi efisen, mungkin disebabkan oleh pembekuan-pembekuan, maka langkah pemanjangan semasa reaksi PCR tidak akan lengkap, sehingga tidak memberi anda produk PCR.

Apa yang menyebabkan penguat dalam PCR?

PCR asas. Proses PCR pada mulanya dikembangkan untuk memperkuat segmen pendek molekul DNA yang lebih panjang (Saiki et al. 1985). Reaksi penguatan khas merangkumi DNA sasaran, polimerase DNA termostabil, dua primer oligonukleotida, trifosfat deoksinukleotida (dNTP), penyangga reaksi dan magnesium.

Apa yang menyebabkan kegagalan PCR?

Biasanya perkara pertama yang dilakukan oleh penyelidik adalah menyalahkan enzim atau reagen yang salah apabila percubaan gagal tetapi dengan PCR ini sebenarnya cenderung menjadi penyebab kegagalan. Masalah dalaman yang lebih kerap seperti reka bentuk primer, parameter termocycler, atau pengikatan yang tidak spesifik untuk urutan templat lain adalah penyebabnya.