Topmusicanswers
- Mengapa tidak ada penguatan dalam PCR?
- Mengapa DNA saya tidak bertambah kuat?
- Apa yang berlaku jika primer tidak ditambahkan ke PCR?
- Bagaimana anda memperbaiki penguatan tidak spesifik dalam PCR?
Mengapa tidak ada penguatan dalam PCR?
Penguatan yang tidak mencukupi boleh berlaku sekiranya jumlah templat awal terlalu rendah. Tingkatkan bilangan kitaran penguatan dengan kenaikan 5, atau, jika boleh, tingkatkan jumlah templat. Bahan cemar dalam campuran dNTP boleh menyebabkan penguatan atau penghambatan PCR yang tidak lengkap atau salah. Gunakan dNTP berkualiti tinggi.
Mengapa DNA saya tidak bertambah kuat?
1) anda mungkin mempunyai reka bentuk primer yang buruk atau standardisasi reaksi (Oleh itu, nilaikan reka bentuk primer anda dan lakukan, seperti yang telah dikatakan oleh orang lain, PCR kecerunan untuk menilai suhu penyepuhlindapan yang berbeza); 2) Tidak ada DNA (protokol pengekstrakan anda mungkin gagal) dan oleh itu, buku asas anda hanya boleh menyatukan satu sama lain (atau menyatukannya).
Apa yang berlaku jika primer tidak ditambahkan ke PCR?
Soalan: Sekiranya anda lupa menambahkan primer pada reaksi PCR anda, apa yang akan berlaku dan mengapa? 1. Reaksi anda akan gagal kerana polimerase Taq tidak dapat menambahkan asas tanpa sekeping DNA kecil yang ada. ... Reaksi anda akan gagal kerana tidak akan ada enzim yang dapat menambahkan asas nukleotida baru.
Bagaimana anda memperbaiki pembesaran tidak spesifik dalam PCR?
Gunakan lebih banyak kitaran ketika kepekatan templat tinggi, dan gunakan lebih banyak kitaran apabila kepekatan templat rendah. 2. Masa peluasan terlalu lama: Masa peluasan yang berlebihan dapat memungkinkan penguatan yang tidak spesifik. Secara amnya, gunakan masa lanjutan 1 min / kb.
