Topmusicanswers
Sebaliknya, keadaan PCR perlu dioptimumkan; pertimbangkan perkara berikut semasa menyesuaikan keadaan PCR:
- Kurangkan jumlah templat.
- Meningkatkan suhu penyepuhlindapan.
- Gunakan PCR touchdown.
- Kurangkan bilangan kitaran PCR.
- Reka semula primer.
- Gunakan primer bersarang.
- Kukuhkan semula produk.
- Mengapa PCR saya tidak berfungsi?
- Bagaimana anda mengoptimumkan keadaan PCR?
- Apa yang menyebabkan smear pada PCR?
- Bagaimana anda tahu jika PCR tercemar?
Mengapa PCR saya tidak berfungsi?
Melupakan hanya satu komponen reaksi PCR, sama ada DNA polimerase, primer atau bahkan DNA templat, akan menghasilkan reaksi yang gagal. Penyelesaian paling mudah adalah mengulangi tindak balas. ... Sekiranya masih belum ada produk PCR setelah ini, kemungkinan ada perkara lain yang menghalang reaksi anda.
Bagaimana anda mengoptimumkan keadaan PCR?
Keadaan PCR
- Gunakan suhu denaturasi yang lebih tinggi (e.g., 98 ° C berbanding 94 ° C atau 95 ° C) untuk membolehkan denaturasi lengkap templat.
- Teruskan masa penyepuhlindapan untuk templat kaya GC sesingkat mungkin.
- Gunakan primer dengan T yang lebih tinggim (>68 ° C), kerana penyepuhlindapan boleh berlaku pada suhu yang lebih tinggi.
Apa yang menyebabkan smear pada PCR?
Pencemaran DNA, RNA dalam sampel DNA, kepekatan DNA yang tinggi dalam tindak balas PCR boleh menyebabkan smear. ... Pemburuan DNA biasanya disebabkan oleh tanaman kerana kepekatan DNA templat yang tinggi.
Bagaimana anda tahu jika PCR tercemar?
Untuk memeriksa penyelesaian pencemaran, kumpulkan reaksi kawalan negatif menggunakan reagen baru yang diketahui tidak tercemar, dan tambahkan salah satu penyelesaian yang disyaki pada setiap reaksi. Reaksi tersebut menunjukkan produk yang diperkuatkan menunjukkan pencemaran adalah bukti bahawa larutan yang ditambahkan telah tercemar.
