Topmusicanswers
Jumlah keseluruhan DNA dalam PCR mempunyai kesan yang nyata terhadap hasil prosedur PCR. Menggunakan terlalu banyak jumlah DNA menghasilkan DNA yang dibungkus di ruang terkurung kapal reaksi dan boleh menyebabkan pemalsuan palsu dan bahkan sintesis DNA yang lemah kerana penyebaran molekul Taq polimerase yang terhalang.
- Berapa banyak templat yang harus saya tambah pada PCR?
- Primer terlalu banyak boleh menghalang PCR?
- Apa yang boleh menyebabkan reaksi PCR gagal?
- Berapa banyak DNA yang mencukupi untuk PCR?
Berapa banyak templat yang harus saya tambah pada PCR?
Walaupun secara teori, satu molekul templat akan mencukupi, jumlah DNA yang jauh lebih besar biasanya digunakan untuk PCR klasik, misalnya, hingga 1 µg DNA mamalia genomik dan sedikitnya 1 pg DNA plasmid (1).
Primer terlalu banyak boleh menghalang PCR?
Bahan cemar dalam campuran dNTP boleh menyebabkan penguatan atau penghambatan PCR yang tidak lengkap atau salah. Gunakan dNTP berkualiti tinggi. Menggunakan kepekatan primer yang berlebihan dapat meningkatkan kemungkinan primer mengikat bukan khusus ke laman web yang tidak diingini pada templat atau satu sama lain.
Apa yang boleh menyebabkan reaksi PCR gagal?
Melupakan hanya satu komponen reaksi PCR, sama ada DNA polimerase, primer atau bahkan DNA templat, akan menghasilkan reaksi yang gagal. Penyelesaian paling mudah adalah mengulangi tindak balas. ... Sekiranya masih belum ada produk PCR setelah ini, kemungkinan ada perkara lain yang menghalang reaksi anda.
Berapa banyak DNA yang mencukupi untuk PCR?
Dalam tindak balas khas 50 µL, 1-2 unit polimerase DNA mencukupi untuk penguatan DNA sasaran. Walau bagaimanapun, mungkin perlu untuk menyesuaikan jumlah enzim dengan templat yang sukar. Contohnya, apabila terdapat perencat dalam sampel DNA, peningkatan jumlah polimerase DNA dapat meningkatkan hasil PCR.
